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噬菌体展示技术发现抗体的流程

2022-11-14 灵灵一

一、简介

      从浆细胞中扩增抗体的H链和L链基因,并构建成文库,抗体片段群与噬菌体衣壳蛋白融合表达并展示于噬菌体表面,形成噬菌体展示抗体库。主要有三种类型: scFv库(由VH和VL组成,并由一个linker连接成一个单链多肽)、Fab库(含有VH-CH1&VL-CL,并由二硫键连接在一起)和VHH库(只有重链可变区针对驼科动物),针对不同筛选源设计合适的淘选方案,经过3-4轮富集,最终得到阳性克隆,经测序得到抗体序列。

111.png

二、相较于传统抗体发现平台噬菌体展示的优势 

技术

免疫血清

杂交瘤

噬菌体展示

抗体类型

多克隆抗体

单克隆抗体

重组抗体

抗体种类

/

IgG(少数为其它类型)

IgG,scFv,Fab,VHH等

物种

多种动物

大鼠小鼠

人和各种动物

宿主细胞

/

杂交瘤

细菌/293/CHO

筛选范围

/

≤10^3

10^7-10^11

时间

几个月

几个月

几周

操作

简单

复杂

较简单

免疫

必须

必须

非必须

人源抗体

/

/

可以

产量

有限

有限

可通过重组表达实现无限产量

基因获取

/

再克隆后杂交瘤测序,此过程基因容易丢失

直接测序

实验重复性

无法重复

无法重复

有原始库即可重复

发展前景

有限

有限

十分广阔



三、物种&抗体介绍

1.The antibody of camelidae

羊驼体内既有单域重链抗体(IgG2b,IgG2c),又有传统抗体IgG1;绝大多数情况下,选择羊驼开发抗体,只关注到单域重链抗体,忽视了IgG1抗体

Alpaca:IgG1a,IgG1b,IgG2b,IgG2C

Llama:IgG1a,IgG1b,IgG2b,IgG2C

Camel:IgG1a,IgG1b,IgG2a,IgG2c,IgG3



骆驼(camel)

羊驼(alpaca)

大羊驼(llama)

单域抗体含量

单域抗体约70%

单域抗体约25~45%

单域抗体25%~45%

分子内二硫键

分子内二硫键80%

分子内二硫键35%

分子内二硫键20%

人源化程度

65~70%

80%以上

80%以上


图片1.png图片2.png图片3.png

 

2.The antibody from shark

IgNAR 的重链含有 1 个可变区和 5 个恒定区, 可变区通过类似铰链区结构与恒定区相连, 一个柔性接头,连接FR2和FR3,且对 CDR1和 CDR3 的支撑作用不明显。

图片4.png 

 

3.The antibody of Human

图片5.png


人体内主要有4种抗体IgM, IgG, IgE, IgA,其中IgD 不能(未被发现)做抗体.

lIgM是初级抗体,负责对新抗原快速普遍的压制,抗原亲和力较低

lIgG是最普遍的血清抗体, 亲和力高功能多,可以激活多重免疫细胞,也可以穿越胎盘保护胎儿

lIgE是寄生虫/过敏原抗体,这里的寄生虫主要指蠕虫/弓形虫等动物

lIgA是粘膜抗体,会穿过粘膜组织保护相关器官,如肺,肠胃等,在乳汁中也常见 用以保护免疫力尚未发育完全的婴儿的健康

四、淼灵优势资源

l有成熟的文库构建体系。可构建scFv库、Fab库、VHH库。

l可根据客户不同要求构建不同类型,不同物种的文库。

l有完善的一套生物淘选的流程。可根据筛选源性质不同设计不同的淘选方案。

l拥有自己的千亿级天然人源重组抗体库(1011)、百亿级天然纳米抗体库(1010)。

 

五、人源天然库QC鉴定

对构建完成的库中挑选了600多个单克隆进行测序,并分析汇总得到以下结果:

QQ图片20220920085904.pngQQ图片20220920085945.pngQQ图片20220920090034.png

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