2022-11-14 灵灵一
一、简介
从浆细胞中扩增抗体的H链和L链基因,并构建成文库,抗体片段群与噬菌体衣壳蛋白融合表达并展示于噬菌体表面,形成噬菌体展示抗体库。主要有三种类型: scFv库(由VH和VL组成,并由一个linker连接成一个单链多肽)、Fab库(含有VH-CH1&VL-CL,并由二硫键连接在一起)和VHH库(只有重链可变区针对驼科动物),针对不同筛选源设计合适的淘选方案,经过3-4轮富集,最终得到阳性克隆,经测序得到抗体序列。
技术 | 免疫血清 | 杂交瘤 | 噬菌体展示 |
抗体类型 | 多克隆抗体 | 单克隆抗体 | 重组抗体 |
抗体种类 | / | IgG(少数为其它类型) | IgG,scFv,Fab,VHH等 |
物种 | 多种动物 | 大鼠小鼠 | 人和各种动物 |
宿主细胞 | / | 杂交瘤 | 细菌/293/CHO |
筛选范围 | / | ≤10^3 | 10^7-10^11 |
时间 | 几个月 | 几个月 | 几周 |
操作 | 简单 | 复杂 | 较简单 |
免疫 | 必须 | 必须 | 非必须 |
人源抗体 | / | / | 可以 |
产量 | 有限 | 有限 | 可通过重组表达实现无限产量 |
基因获取 | / | 再克隆后杂交瘤测序,此过程基因容易丢失 | 直接测序 |
实验重复性 | 无法重复 | 无法重复 | 有原始库即可重复 |
发展前景 | 有限 | 有限 | 十分广阔 |
三、物种&抗体介绍
羊驼体内既有单域重链抗体(IgG2b,IgG2c),又有传统抗体IgG1;绝大多数情况下,选择羊驼开发抗体,只关注到单域重链抗体,忽视了IgG1抗体
Alpaca:IgG1a,IgG1b,IgG2b,IgG2C
Llama:IgG1a,IgG1b,IgG2b,IgG2C
Camel:IgG1a,IgG1b,IgG2a,IgG2c,IgG3
骆驼(camel) | 羊驼(alpaca) | 大羊驼(llama) | |
单域抗体含量 | 单域抗体约70% | 单域抗体约25~45% | 单域抗体25%~45% |
分子内二硫键 | 分子内二硫键80% | 分子内二硫键35% | 分子内二硫键20% |
人源化程度 | 65~70% | 80%以上 | 80%以上 |
2.The antibody from shark
IgNAR 的重链含有 1 个可变区和 5 个恒定区, 可变区通过类似铰链区结构与恒定区相连, 一个柔性接头,连接FR2和FR3,且对 CDR1和 CDR3 的支撑作用不明显。
3.The antibody of Human
人体内主要有4种抗体IgM, IgG, IgE, IgA,其中IgD 不能(未被发现)做抗体.
lIgM是初级抗体,负责对新抗原快速普遍的压制,抗原亲和力较低
lIgG是最普遍的血清抗体, 亲和力高功能多,可以激活多重免疫细胞,也可以穿越胎盘保护胎儿
lIgE是寄生虫/过敏原抗体,这里的寄生虫主要指蠕虫/弓形虫等动物
lIgA是粘膜抗体,会穿过粘膜组织保护相关器官,如肺,肠胃等,在乳汁中也常见 用以保护免疫力尚未发育完全的婴儿的健康
l有成熟的文库构建体系。可构建scFv库、Fab库、VHH库。
l可根据客户不同要求构建不同类型,不同物种的文库。
l有完善的一套生物淘选的流程。可根据筛选源性质不同设计不同的淘选方案。
l拥有自己的千亿级天然人源重组抗体库(1011)、百亿级天然纳米抗体库(1010)。
五、人源天然库QC鉴定
对构建完成的库中挑选了600多个单克隆进行测序,并分析汇总得到以下结果: