收到产品后，请先观察产品标签获知产品类型，准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度，然后对应查看使用说明。

 

一、即用型液体质粒

 

产品说明

本产品采用自主研发的无内毒素大提试剂盒从大肠杆菌中提取，是一款即用型、高纯度的转染级质粒，质粒构型超螺旋程度显著，内毒素水平极低，适用于多种类型细胞转染、基因表达、病毒包装等实验。

 

操作方法

1，收到后处理：瞬时离心（3000-5000 rpm，10秒），使液体沉至管底。
2，取用：按照标签上的浓度，吸取所需体积。例如：需要1μg质粒，若浓度为600ng/μL，则吸取约1.7μL。
3，保存：剩余质粒建议分装后冻存，避免反复冻融

4，保存条件：-20℃ 保质期：1年

 

注意事项

1、科研专用：仅供科研使用，不得用于临床。
2、浓度确认：使用前请核对管壁标签上的实际浓度，不同批次可能略有差异。
3、稀释方式：可用无菌水或TE缓冲液稀释至目标浓度，稀释后建议当天使用或分装冻存。
4、无菌操作：质粒使用过程中细胞相关操作严格控制无菌环境
5、扩增提示：质粒使用量不足时可以转化大肠杆菌扩增抽提或者淼灵购买

 

 

二、种子型干粉质粒

 

产品说明

本产品为种子质粒，以干粉形式提供，总量约为 0.5~2 μg。需自行转化至感受态细胞抽提纯化后使用，不可直接用于转染。

 

操作方法

1、收到干粉质粒后请先5000rpm离心1min,再加入20ul无菌水溶解质粒;
2、将相应的感受态于冰盒上解冻，取5ul质粒加至100ul 感受态中，冰浴 30min;
3、42度热激60s，冰浴2min，加入900ul无抗LB培养基，180rpm震荡培养45min;
4、6000rpm离心3min，留100ul上清重悬，再涂至对应抗性的LB平板上;
5、倒置培养过夜后，如菌落过多则稀释质粒转化，如没有菌落则取10uI质粒转化

6、挑单菌落至对应抗性的LB液体培养基中过夜震荡培养，根据需要提取质粒。

7、保存条件：-20℃ 保质期：90天

 

注意事项

1、种子质粒：本产品为种子质粒，直接转染效率极低，必须转化扩增后使用。
2、菌落数量控制：平板菌落数以10~300个为佳，过多或过少均可能影响后续单克隆筛选。
3、测序验证：提取质粒后，建议进行测序验证（至少一个反应），确保序列正确。
4、转化条件：转化前请核对质粒的抗性和感受态类型，严格按照感受态说明书操作。
5、剩余质粒：溶解后的干粉质粒需-20℃保存，但反复冻融会降低转化效率，建议分装后冻存。

 

 

平板图效果图如上

菌落过多或过少都有可能会影响后续提取结果

 

三、种子型甘油菌种

 

本产品为将目标质粒转化至克隆感受态细胞（如DH5α、Stbl3等）后，挑取单菌落制备的甘油菌，甘油终浓度20%。菌株已携带您所需的质粒，无需自行转化，划线复苏后即可挑取单菌落扩增提取质粒。

 

操作方法

1、收到甘油菌种后甩动保存管，让菌液不要吸附在管壁上

2、用接种环在含有相应抗性的固体平板上四区划线

3、恒温培养箱倒置培养12~16h;

4、务必挑取单菌落接种于含有相应抗性的液体培养基中

5、摇床震荡培养过夜，根据实验需要培养菌种。

6、保存条件：-80℃ 保质期：90天

 

注意事项

1、必须挑单菌落：直接从甘油菌中取菌液摇菌会导致菌种不纯、质粒突变或丢失的风险。
2、抗性匹配：划线及摇菌时，务必加入与质粒一致的抗生素。
3、长期保存：复苏后的新鲜菌液可重新制备甘油菌（终浓度20%），-80℃保存。