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发表期刊：Nature > Signal Transduction and Targeted Therapy

发表时间：2025.1

IF：40.8

英文标题：

VCP downstream metabolite glycerol-3-phosphate (G3P) inhibits CD8+T cells function in the HCC microenvironment

中文标题：

VCP下游代谢产物甘油-3-磷酸（G3P）抑制CD8⁺T细胞在HCC微环境中的功能

DOI:10.1038/s41392-024-02120-8

原文链接：https://doi.org/10.1038/s41392-024-02120-8

摘要总结

该研究团队发现，在患有肝细胞癌（HCC）的患者中，肿瘤微环境（TME）中的肿瘤免疫核心细胞CD8T通常功能受损，研究人员发现，VCP蛋白可以抑制CD8T细胞的激活、扩增和细胞毒性。降低对抗HCC肿瘤的能力。CDT8细胞的激活需要抗原的持续刺激，而OVAL（OVA）是生物医学研究中应用极其广泛的模式抗原和实验工具蛋白。为了更好的模拟小鼠体内HCC免疫微环境，构建OVA过表达的Hepa 1–6细胞稳转株（Hepa 1-6-OVA）模拟肿瘤细胞，与CDT8细胞共培养，通过过表达OVA蛋白，持续激活CDT8细胞。

实验结果证明，敲低了VCP表达的Hepa 1-6-OVA细胞和CDT8细胞无论是接触还是非接触共培养，对比没有敲低VCP表达的对照组，CD8T细胞凋亡数量减少，Hepa 1-6-OVA细胞凋亡比例增加。敲低了VCP表达的Hepa 1-6-OVA细胞和CDT8细胞用同一培养基先后培养，对比没有敲低VCP表达的对照组，CD8T细胞的增殖速度和细胞因子水平都显著上升。揭示了VCP可以通过下游代谢产物，来抑制CD8T细胞功能和扩增。

为了得到稳定有效的细胞细胞株，研究团队在与我们淼灵质粒平台的沟通下，选择了P0268  （pCDH-CMV-MCS-EF1-CopGFP-T2A-Puro），构建出了P43339（pLV3-CMV-OVAL(chicken)-CopGFP-Puro）。利用慢病毒类载体的特性，构建OVA过表达的Hepa 1–6细胞。

核心实验环节

在文章Materials and methods材料与方法的Plasmids中，明确写到：

实验中所使用到的质粒pCMV-His-UB (P4836)和pLV3-CMV-OVAL(chicken)-CopGFP-Puro (P43339)均来自于淼灵生物。

在文章VCP制CD8T细胞功能部分，明确写道：

为阐明VCP的功能机制，对CD8+T细胞与表达卵白蛋白的Hepa 1–6细胞（Hepa 1-6-OVA）进行了共培养。肿瘤细胞中缺失Vcp增强了CD8+T细胞的细胞毒性，诱导肿瘤细胞凋亡，减少 CD8+T 细胞凋亡，并上调了细胞因子GzmB和IFN-γ的水平，与我们的体内观察一致。在淋巴结转移到肿瘤后，CD8+T细胞识别肿瘤呈递的抗原并发挥杀伤作用。为了确定VCP是否影响抗原呈递，研究团队采用Transwell系统进行了非接触共培养实验。同样，肿瘤细胞的Vcp耗竭会增加肿瘤细胞的凋亡率，CD8+T细胞凋亡减少，促进CD8+T细胞增殖，以及细胞因子表达，排除了VCP对肿瘤抗原呈现的影响。

pCDH-CMV-MCS-EF1-CopGFP-T2A-Puro（P0268）在实验的关键核心作用：

①质粒通用性与高效表达

具有可用于表达多种物种的基因蛋白，适配多种细胞并保持质粒高活性，满足后续实验要求。

②提高实验效率

质粒携带荧光，无需WB、qPCR等实验，观察荧光即可判断实验是否初步成功，提高实验效率。

③慢病毒液的高得率

基于本身病毒载体的特性，可包装为浓度高、效果好的慢病毒液，成功构建目的细胞株，为实验营造理想环境。