细胞裂解液配方和选择
1► 细胞裂解液的目的
(1)利用去垢剂破坏脂质双分子层，破裂细胞;
(2)溶解蛋白;
(3)蛋白变性使其稳定;
(4)抑制蛋白酶活性。
常见的细胞裂解液成分：
50mM Tris-HCl pH7.4 (缓冲体系)
150mM NaCl (等渗体系)
1mM PMSF (蛋白酶抑制剂)
1mM EDTA (变性剂和稳定剂)
5μg/ml Aprotinin (蛋白酶抑制剂)
5μg/ml Leupeptin (蛋白酶抑制剂)
1% Triton X-100 (弱变性剂)
0.1% SDS (强变性剂和溶解剂)
1% Sodium deoxycholate (中度变性剂和溶解剂)
2► 细胞裂解液的一般成分
1. 裂解成分：破坏细胞膜裂解组织或细胞。裂解强度：SDS(基本会使蛋白变性失活) > Triton X-100 > NP-40
| 英文名 | 中文名 | 裂解强度和去垢剂类型 | 作用 |
|---|---|---|---|
| SodiumDeoxycholate | 脱氧胆酸钠 | 中度；阴离子型 | 能够有效破坏多种蛋白间的相互作用 |
| 1%Triton X-100 | 曲拉通X-100 | 温和；非离子型 | 溶解脂质，增加细胞膜的通透性 |
| 0.1%SDS | 十二烷基硫酸钠 | 强；阴离子型 | 强变性，极易促溶，能够有效破坏多种蛋白间的相互作用 |
| 1%NP-40 | 乙基苯基聚乙二醇 | 温和；非离子型 | 可破坏掉细胞膜，获得胞浆蛋白，对核膜的破坏作用较弱 |
2. 蛋白酶抑制剂：抑制蛋白酶的活性，避免蛋白过度降解。
| 英文名 | 中文名 | 作用 |
|---|---|---|
| PMSF | 苯甲基磺酰氟 | 抑制丝氨酸和半胱氨酸蛋白酶 |
| Leupeptin | 亮肽素 | 抑制丝氨酸和半胱氨酸蛋白酶 |
| Aprotinin | 抑肽酶 | 抑制丝氨酸蛋白酶 |
| Pepstatin | 胃酶抑制剂 | 抑制天冬氨酸蛋白酶、多种微生物酸性蛋白酶 |
| EDTA-Na2 | 乙二胺四乙酸 | 多数核酸酶和有些蛋白酶需要金属离子激活酶的活性，EDTA可螯合金属离子，抑制酶活 |
3. 磷酸酶抑制剂：抑制去磷酸化作用。
| 英文名 | 中文名 | 作用 |
|---|---|---|
| NaF | 氟化钠 | 抑制去磷酸化作用 |
| Na2VO4 | 钒酸钠 | 抑制去磷酸化作用 |
| Beta-glycerophosphate | β-甘油磷酸酯 | 抑制去磷酸化作用 |
| Na2PO4 | 磷酸钠 | 抑制去磷酸化作用 |
* 可根据目的蛋白的特性对裂解液配方做出调整，例如：非磷酸化蛋白可不添加磷酸酶抑制剂；IP背景高，选用裂解度高的裂解液；目的蛋白IP 不下来，选用裂解度低的裂解液等等。
1.细胞裂解液影响细胞膜和核膜的破坏效率， 所以应根据目标分子在细胞内的定位选择裂解液。此外，不同的细胞和组织具有不同的膜组成和结构，需要针对其特性选择特定裂解液。使用错误的细胞裂解液可能导致细胞裂解不完全，进而影响数据的准确性。
2.适当的裂解液对于维持细胞内目标分子的稳定性和完整性至关重要。例如，在核酸研究中，裂解液会影响RNA、DNA及其修饰的完整性。在蛋白质组学中，它影响蛋白质和翻译后修饰的稳定性。使用错误的缓冲液可能导致这些分子的降解或变性，从而损害下游分析的准确性。
3.细胞裂解液对试验结果的一致性有重要的影响。不同的缓冲液pH值、离子强度和去垢剂不同，这些因素可能影响酶、蛋白质和其他细胞组分的结构和活性。保持缓冲液一致性对于确保实验的可重复性至关重要。
4.选择错误的裂解液会造成样品中无目的蛋白情况，例如目的蛋白为核蛋白时请勿使用NP40 这类温和的裂解液。
如果是分泌型蛋白，例如细胞因子或趋化因子等，组织或者细胞的裂解液可能并不能直接反映目的蛋白的表达水平，一方面可以通过刺激处理促进其胞内表达，另一方面可以尝试ELISA或者Luminex 多因子检测等实验方法对细胞上清液或者生物体液等进行检测。此外，样本收集及保存过程中，需要考虑目的蛋白降解的风险，建议使用新鲜的裂解液对新鲜收集的样本进行蛋白提取，并确保裂解液中蛋白酶抑制剂及磷酸酶抑制剂活性，防止蛋白降解。样本尽量低温保存，并避免反复冻融。
