噬菌体展示技术发现抗体的流程
一、简介
从浆细胞中扩增抗体的H链和L链基因，并构建成文库，抗体片段群与噬菌体衣壳蛋白融合表达并展示于噬菌体表面，形成噬菌体展示抗体库。主要有三种类型: scFv库(由VH和VL组成，并由一个linker连接成一个单链多肽)、Fab库(含有VH-CH1&VL-CL，并由二硫键连接在一起)和VHH库(只有重链可变区针对驼科动物)，针对不同筛选源设计合适的淘选方案，经过3-4轮富集，最终得到阳性克隆，经测序得到抗体序列。
二、相较于传统抗体发现平台噬菌体展示的优势
| 技术 | 免疫血清 | 杂交瘤 | 噬菌体展示 |
|---|---|---|---|
| 抗体类型 | 多克隆抗体 | 单克隆抗体 | 重组抗体 |
| 抗体种类 | / | lgG（少数为其他类型） | lgG，scFv，Fab，VHH等 |
| 物种 | 多种动物 | 大鼠小鼠 | 人和各种动物 |
| 宿主细胞 | / | 杂交瘤 | 细菌/293/CHO |
| 筛选范围 | / | ≤103 | 107-1011 |
| 时间 | 几个月 | 几个月 | 几周 |
| 操作 | 简单 | 复杂 | 较简单 |
| 免疫 | 必须 | 必须 | 非必须 |
| 人源抗体 | / | / | 可以 |
| 产量 | 有限 | 有限 | 可通过重组表达实现无限产量 |
| 基因获取 | / | 再克隆后杂交瘤测序，此过程基因容易丢失 | 直接测序 |
| 实验重复性 | 无法重复 | 无法重复 | 有原始库即可重复 |
| 发展前景 | 有限 | 有限 | 十分广阔 |
三、物种&抗体介绍
1.The antibody of camelidae
羊驼体内既有单域重链抗体（IgG2b，IgG2c），又有传统抗体IgG1；绝大多数情况下，选择羊驼开发抗体，只关注到单域重链抗体，忽视了IgG1抗体
Alpaca：IgG1a，IgG1b，IgG2b，IgG2C
Llama：IgG1a，IgG1b，IgG2b，IgG2C
Camel：IgG1a，IgG1b，IgG2a，IgG2c，IgG3
| 骆驼(camel) | 羊驼(alpaca) | 大羊驼(llama) | |
|---|---|---|---|
| 单域抗体含量 | 单域抗体约70% | 单域抗体约25~45% | 单域抗体25%~45% |
| 分子内二硫键 | 分子内二硫键80% | 分子内二硫键35% | 分子内二硫键20% |
| 人源化程度 | 65~70% | 80%以上 | 80%以上 |
2.The antibody from shark
IgNAR的重链含有1个可变区和5个恒定区, 可变区通过类似铰链区结构与恒定区相连, 一个柔性接头，连接FR2和FR3，且对CDR1和CDR3的支撑作用不明显。
3.The antibody of Human
人体内主要有4种抗体IgM，IgG， IgE，IgA，其中IgD不能（未被发现）做抗体.
lIgM是初级抗体，负责对新抗原快速普遍的压制，抗原亲和力较低
lIgG是最普遍的血清抗体，亲和力高功能多，可以激活多重免疫细胞，也可以穿越胎盘保护胎儿
lIgE是寄生虫/过敏原抗体，这里的寄生虫主要指蠕虫/弓形虫等动物
lIgA是粘膜抗体，会穿过粘膜组织保护相关器官，如肺，肠胃等，在乳汁中也常见 用以保护免疫力尚未发育完全的婴儿的健康
四、淼灵优势资源
l 有成熟的文库构建体系。可构建scFv库、Fab库、VHH库。
l 可根据客户不同要求构建不同类型，不同物种的文库。
l 有完善的一套生物淘选的流程。可根据筛选源性质不同设计不同的淘选方案。
l 拥有自己的千亿级天然人源重组抗体库（1011）、百亿级天然纳米抗体库（1010）。
五、人源天然库QC鉴定
对构建完成的库中挑选了600多个单克隆进行测序，并分析汇总得到以下结果：
