pGEX-4T-1 现货原核表达质粒

【基本介绍】
　　pGEX-4T-1 是一款经典、高效的原核表达质粒，适用于在大肠杆菌（E. coli）中进行GST融合蛋白的高效表达与纯化。该载体采用 tac 启动子驱动目的基因表达，在 IPTG 诱导下可实现外源蛋白的高水平转录与翻译。载体 N 端携带 GST（谷胱甘肽-S-转移酶）标签，便于通过亲和层析进行快速纯化，同时可经 PreScission Protease 或 Thrombin 酶切去除标签，获得天然目的蛋白。
　　该产品由武汉淼灵生物科技有限公司自主研发并现货保藏，属于公司超10万种现货质粒库中的核心产品之一。作为国内领先的现货质粒供应商，淼灵生物提供该载体的干粉、液体等多种规格，支持即买即用，现货订单平均8小时内发货，极大缩短实验周期。

【元件信息】
| 元件 | 名称 | 功能描述 |
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| tac promoter | tac 杂合启动子 | IPTG 诱导型启动子，驱动目的基因高效转录 |
| lacI | lac 抑制子基因 | 组成型表达 Lac 抑制子，调控 tac 启动子的诱导表达 |
| GST | 谷胱甘肽-S-转移酶标签 | N 端融合标签，用于亲和纯化，提升蛋白可溶性表达 |
| MCS | 多克隆位点 | 用于插入目的基因，包含多种限制性酶切位点 |
| Thrombin site | 凝血酶切割位点 | 用于切除 GST 标签，获得天然目的蛋白 |
| PreScission site | PreScission 蛋白酶切割位点 | 用于切除 GST 标签，获得天然目的蛋白 |
| AmpR | 氨苄青霉素抗性基因 | 用于大肠杆菌中的筛选与扩增 |
| pBR322 ori | pBR322 复制起点 | 维持质粒在大肠杆菌中的低拷贝复制（约 15-20 拷贝/细胞） |

【使用说明】
　　1. 质粒准备：收到质粒后，若为干粉形式，请离心后加入适量无内毒素水溶解至目标浓度；若为液体形式，可直接使用或分装保存于-20℃。
　　2. 转化扩增：若质粒量不足，可转化至 BL21（DE3） 或 DH5α 感受态细胞中进行扩增，使用氨苄青霉素（Ampicillin）筛选。
　　3. 诱导表达：
　　　- 将含 pGEX-4T-1 重组质粒的 BL21（DE3）菌株接种至 LB 培养基（含 Amp），37℃ 振荡培养至 OD600 ≈ 0.6-0.8。
　　　- 加入 IPTG 至终浓度 0.1-1.0 mM，诱导温度可选择 16-37℃，诱导时间 4-16 小时，根据目标蛋白特性优化诱导条件。
　　4. 菌体收集与裂解：离心收集菌体，用裂解缓冲液重悬，通过超声或高压均质破碎细胞，离心收集上清或沉淀（视蛋白可溶性而定）。
　　5. GST 亲和纯化：将裂解上清与 Glutathione Sepharose 介质孵育，用含还原型谷胱甘肽的洗脱缓冲液洗脱目的蛋白，获得高纯度 GST 融合蛋白。
　　6. 标签切除（可选）：如需去除 GST 标签，可使用 Thrombin 或 PreScission Protease 在适当条件下进行酶切。

【应用场景】
　　重组蛋白表达与纯化：用于在大肠杆菌中高效表达并快速纯化重组蛋白，GST 标签可显著提升可溶性表达水平。
　　蛋白相互作用研究：利用 GST pull-down 技术，研究蛋白质-蛋白质、蛋白质-核酸等相互作用。
　　抗体生产与筛选：作为免疫原生产重组抗原，用于多克隆或单克隆抗体的制备与筛选。
　　酶活性分析：表达并纯化具有酶活性的重组蛋白，用于酶动力学研究及抑制剂筛选。
　　结构生物学研究：制备高纯度蛋白样品，用于 X 射线晶体衍射、核磁共振（NMR）等结构解析。

【注意事项】
　　- 本产品仅供科研使用，不能用于临床试验，包括人体口服、注射或者体外用药。
　　- 质粒溶液可以根据需求加无内毒水稀释至目标浓度。
　　- 质粒使用量不足时可以转化大肠杆菌扩增抽提或者淼灵购买。
　　- 操作说明仅供参考，实际使用过程中严格按照各个试剂说明书操作。
　　- 质粒使用过程中细胞相关操作严格控制无菌环境。
　　- 本质粒提取可能形成二聚体，大小约 5.0 kb 左右，不影响后续使用。
　　- 转染时的细胞密度一般控制在80%左右比较合适，不同细胞的最佳转染密度可能有差异。
　　- 转染效率低：检查质粒质量、细胞状态、转染试剂用量及细胞密度，优化转染条件。
　　- 转染后细胞异常：减少转染试剂用量，或更换转染试剂，优化转染的细胞密度。
　　- 慢病毒需要注意保存温度，并且避免多次反复冻融。
　　- 使用慢病毒感染细胞时，严格控制细胞密度以及最佳使用MOI。

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