pET-32a 现货原核表达质粒

【基本介绍】
　　pET-32a 是一款经典、高效的原核表达质粒，广泛应用于大肠杆菌系统中的重组蛋白表达。该载体采用强大的 T7 启动子，在 IPTG 诱导下可实现外源基因的高水平表达。pET-32a 携带 Trx·Tag（硫氧还蛋白标签），可显著提高目标蛋白的可溶性表达水平，减少包涵体形成，同时融合 His·Tag（6×His 标签），便于通过镍柱亲和层析进行一步纯化。
　　该产品由武汉淼灵生物科技有限公司现货保藏，属于公司超10万种现货质粒库中的原核表达系列核心产品。作为国内领先的现货质粒供应商，淼灵生物提供该载体的干粉、液体等多种规格，支持即买即用，现货订单平均8小时内发货，助力科研人员快速启动蛋白表达实验。

【元件信息】
| 元件 | 名称 | 功能描述 |
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| T7 promoter | T7 噬菌体启动子 | 驱动外源基因高效转录，需 T7 RNA 聚合酶 |
| lac operator | 乳糖操纵子 | 与 lacI 阻遏蛋白结合，实现 IPTG 诱导调控 |
| Trx·Tag | 硫氧还蛋白标签 | 促进目标蛋白可溶性表达，减少包涵体形成 |
| His·Tag（6×His） | 组氨酸标签 | 用于镍柱亲和纯化，便于快速获取纯化蛋白 |
| S·Tag | S 标签 | 用于蛋白检测与纯化的辅助标签 |
| multiple cloning site（MCS） | 多克隆位点 | 用于插入目标基因，提供多种限制性酶切位点 |
| T7 terminator | T7 转录终止子 | 确保转录终止，提高表达稳定性 |
| lacI | 乳糖阻遏蛋白编码基因 | 维持 lac operator 的阻遏状态，实现诱导调控 |
| AmpR | 氨苄青霉素抗性基因 | 用于大肠杆菌中的筛选与扩增 |
| pBR322 ori | pBR322 复制起点 | 维持质粒在大肠杆菌中的低拷贝复制，提高稳定性 |

【使用说明】
　　1. 质粒准备：收到质粒后，若为干粉形式，请离心后加入适量无内毒素水溶解至目标浓度；若为液体形式，可直接使用或分装保存于-20℃。
　　2. 转化扩增：将质粒转化至表达宿主菌（如 BL21（DE3）、Rosetta（DE3） 等）中进行扩增与表达，使用氨苄青霉素（Ampicillin，100 μg/mL）筛选。
　　3. 诱导表达：挑取单克隆接种至 LB 液体培养基（含 Amp），37℃ 振荡培养至 OD600 约 0.6-0.8，加入 IPTG 至终浓度 0.1-1 mM，诱导表达 2-6 小时（可根据蛋白特性优化诱导温度与时间）。
　　4. 样品收集与裂解：诱导结束后离心收集菌体，使用裂解缓冲液重悬，通过超声或高压均质破碎细胞，离心分离上清与沉淀，分析目标蛋白的可溶性。
　　5. 蛋白纯化：利用 His·Tag 与镍柱结合，通过亲和层析纯化目标蛋白，可使用不同浓度的咪唑进行洗脱，获得高纯度蛋白。

【应用场景】
　　重组蛋白表达与纯化：利用 Trx·Tag 提高可溶性表达水平，结合 His·Tag 一步亲和纯化，快速获取高纯度重组蛋白，适用于酶学、结构生物学、抗体生产等领域。
　　蛋白功能研究：通过表达纯化目标蛋白，开展酶活性分析、蛋白相互作用、药物筛选等研究。
　　抗原制备：用于生产重组蛋白抗原，支持单克隆抗体、多克隆抗体的制备与筛选。
　　融合蛋白表达：借助 Trx·Tag 和 His·Tag，表达具有特定功能的融合蛋白，便于后续检测与纯化。
　　表达条件优化：通过调整 IPTG 浓度、诱导温度与时间，优化难表达蛋白的可溶性及产量。

【注意事项】
　　- 本产品仅供科研使用，不能用于临床试验，包括人体口服、注射或者体外用药。
　　- 质粒溶液可以根据需求加无内毒水稀释至目标浓度。
　　- 质粒使用量不足时可以转化大肠杆菌扩增抽提或者淼灵购买。
　　- 操作说明仅供参考，实际使用过程中严格按照各个试剂说明书操作。
　　- 质粒使用过程中细胞相关操作严格控制无菌环境。
　　- 本质粒提取可能形成二聚体，大小约 5.9 kb 左右，不影响后续使用。
　　- 转染时的细胞密度一般控制在80%左右比较合适，不同细胞的最佳转染密度可能有差异。
　　- 转染效率低：检查质粒质量、细胞状态、转染试剂用量及细胞密度，优化转染条件。
　　- 转染后细胞异常：减少转染试剂用量，或更换转染试剂，优化转染的细胞密度。
　　- 慢病毒需要注意保存温度，并且避免多次反复冻融。
　　- 使用慢病毒感染细胞时，严格控制细胞密度以及最佳使用MOI。

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