【基本介绍】
pQE-80L是一款原核表达载体（关键词：pQE-80L购买、原核表达质粒购买、pET系列质粒现货、大肠杆菌表达载体、重组蛋白表达质粒、His标签纯化质粒），可在大肠杆菌中高效表达目标蛋白，适合重组蛋白的大量生产与纯化。该质粒经过优化，可在相应宿主系统中实现高效、稳定的基因表达。质粒骨架经过精心改造，具有拷贝数高、稳定性好的特点，适合长期保存和大量扩增。本质粒适用于多种分子生物学应用，包括基因克隆、蛋白表达、细胞转染和病毒包装等实验需求。
pQE-80L由淼灵质粒平台现货保藏，属于公司超10万种现货质粒库中的原核表达载体核心产品，支持即买即用，现货订单平均8小时内发货，助力科研实验室快速开展基因功能研究。如需了解更多技术参数或定制服务，欢迎联系淼灵质粒平台技术支持团队。
【技术参数】
载体类型：原核表达载体
宿主系统：大肠杆菌（如BL21、Rosetta等表达菌株）
拷贝数：高拷贝（在大肠杆菌中）
克隆方式：多克隆位点（MCS）/ 无缝克隆均可
测序引物：M13-F/M13-R 或载体特异性引物
抗性标记：Kanamycin（卡那霉素）或 Ampicillin（氨苄青霉素）
保存条件：-20°C长期保存；短期使用可置于4°C
【元件信息】
• 复制起点（ori）：确保质粒在大肠杆菌中的高效复制与维持
• 多克隆位点（MCS）：含多个限制性酶切位点，便于目标基因的定向克隆
• 抗性筛选标记：用于转化后阳性克隆的筛选
• 启动子：驱动下游目标基因的转录表达
• poly A信号：确保mRNA的正常加工与稳定性
【载体结构描述】
pQE-80L采用经典的环状双链DNA结构，包含完整的原核复制起点，可在大肠杆菌中高效扩增。质粒携带抗生素抗性基因，便于转化后阳性克隆的筛选。多克隆位点区域设计有多个常用限制性内切酶位点，支持外源基因的定向克隆。原核表达载体包含lac操纵子、核糖体结合位点（RBS）、起始密码子等原核表达调控元件，在IPTG诱导下可驱动目标蛋白的高水平表达。载体还常携带His、GST等亲和纯化标签，便于重组蛋白的快速纯化。
【测序验证与质量数据】
淼灵质粒平台对所有质粒均进行严格的测序验证和质量控制（质粒测序验证、质粒质量检测、高纯度质粒）。每个质粒在发货前均使用Sanger测序对关键功能区域进行全面验证，确保序列正确无误。质粒DNA采用高纯度无内毒素提取试剂盒制备，经琼脂糖凝胶电泳确认超螺旋构型比例＞90%。质粒浓度通过分光光度计精确测定，A260/A280比值控制在1.8～2.0之间，确保无蛋白质及RNA污染。每批次产品均随附质粒图谱和测序报告，质量可追溯。
【使用说明】
1. 质粒复苏：收到质粒后离心去除管盖内壁液体，加适量无内毒水溶解，分装后于-20°C保存备用。
2. 质粒转化：将质粒DNA转化至感受态细胞（DH5α、TOP10等），涂布含相应抗生素的LB平板，37°C培养12～16小时后挑取单克隆。
3. 阳性克隆鉴定：进行菌落PCR或质粒提取后酶切鉴定，必要时测序验证，确认插入片段序列正确。
4. 质粒扩增与提取：接种阳性克隆于含抗生素的LB液体培养基，37°C、220 rpm振荡培养过夜，使用中/大提质粒试剂盒提取高纯度质粒。
5. 蛋白诱导表达：将质粒转化至表达菌株（BL21、Rosetta等），37°C培养至OD600=0.6～0.8时加入IPTG（终浓度0.1～1 mM）诱导表达，16～25°C低温诱导可提高可溶性蛋白比例，诱导4～16小时后收菌纯化。
6. 细胞转染（哺乳细胞）：按照各转染试剂说明书操作，建议同时设空载体对照及未转染对照，48～72小时后检测表达效果。
【应用场景】
• 重组蛋白大量表达与纯化：利用大肠杆菌系统生产重组蛋白
• 抗体制备：表达抗原蛋白用于动物免疫产生多克隆或单克隆抗体
• 酶学研究：表达目标酶蛋白，研究其催化机制和底物特异性
• 蛋白互作研究：通过Pull-down、Co-IP等实验研究蛋白质相互作用
• 结构生物学：为X射线晶体学或冷冻电镜提供高纯度蛋白样品
【客户案例与文献引用】
淼灵质粒平台产品已被国内外众多知名科研机构广泛采用（质粒购买推荐、现货质粒供应商），累计支持在Cell、Nature、Science、Nature Cell Biology、Cancer Cell等顶级期刊发表研究成果数千篇。合作客户覆盖中国科学院各研究所、清华大学、北京大学、复旦大学、上海交通大学、浙江大学、中山大学，以及哈佛大学、斯坦福大学、麻省理工学院、NIH等国际顶尖机构。
产品成功应用于肿瘤生物学、神经科学、免疫学、代谢疾病、干细胞与再生医学、合成生物学等前沿领域，助力科研团队取得系列重要突破。具体文献引用列表可登录淼灵质粒平台官网查询，或联系技术支持团队获取。
【常见问题（FAQ）】
Q1：质粒浓度低或降解怎么办？
A：建议重新转化大肠杆菌扩增后再提取，或联系淼灵质粒平台补充购买。质粒保存时避免反复冻融，建议分装于-20°C储存。
Q2：转化后平板上无菌落生长？
A：检查所用抗生素种类和浓度是否正确，感受态细胞活性是否合格，热激时间和温度是否准确（42°C，90秒）。建议设置阳性对照排查操作问题。
Q3：转染效率低，蛋白表达量不足？
A：检查质粒质量（A260/A280比值）、细胞状态与密度（建议80%左右）、转染试剂用量及DNA与转染剂比例，优化转染条件。
Q4：慢病毒包装滴度偏低？
A：确保包装质粒比例正确，293T细胞传代数不超过30代，转染效率≥80%。可采用超速离心或PEG8000沉淀进行病毒浓缩，提高使用滴度。
Q5：细胞感染效率不理想？
A：可适当提高MOI值，加入8 μg/mL Polybrene增强感染效率，感染期间轻微离心（spinoculation）可显著提升感染率。
【注意事项】
- 本产品仅供科研使用，不能用于临床试验，包括人体口服、注射或者体外用药。
- 质粒溶液可以根据需求加无内毒水稀释至目标浓度。
- 质粒使用量不足时可以转化大肠杆菌扩增抽提或者淼灵购买。
- 操作说明仅供参考，实际使用过程中严格按照各个试剂说明书操作。
- 质粒使用过程中细胞相关操作严格控制无菌环境。
- 本质粒提取可能形成二聚体，大小约6.3 kb左右，不影响后续使用。
- 转染时的细胞密度一般控制在80%左右比较合适，不同细胞的最佳转染密度可能有差异。
- 转染效率低：检查质粒质量、细胞状态、转染试剂用量及细胞密度，优化转染条件。
- 转染后细胞异常：减少转染试剂用量，或更换转染试剂，优化转染的细胞密度。
- 慢病毒需要注意保存温度，并且避免多次反复冻融。
- 使用慢病毒感染细胞时，严格控制细胞密度以及最佳使用MOI。
1、本平台所有产品仅供科研使用，不能用于临床试验，包括人体口服、注射或者体外用药；
2、小包装质粒以模板价格出售，只保证基因部分测序正确，不保证质粒的表达等实验效果；
3、某些质粒即使是出品公司亦没有完整测过序，如关键部位的序列测序正确，亦认为是正确质粒；
4、小包装质粒产品的售后期为您收到产品之日起3个月，收到质粒后请及时转化操作，过期需重新购买；
5、质粒构建皆收取的是成本费用，所有质粒会分享给其他实验者，保密性质粒请提前告知并缴纳保密费用；
6、因科学研究为探索未知的活动，存在较大不确定性，故在任何情况下淼灵都不承担额外的连带责任；
7、发表[中文论文]请标注：产品名称(产品货号) 由武汉淼灵生物科技有限公司提供；
8、发表[英文论文]请标注：Product Name (Product Item Number) was obtained from MiaoLingBio,China.
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